DNA RECOMBINANTE

O rDNA foi sintetizado pela primeira vez em 1972 por Paul Berg, da Universidade de Stanford. Ele juntou uma sequência de DNA viral com uma sequência de DNA bacteriano, e implantou a molécula em um vírus que infecta símios. Ainda na década de 70, Herbert Boyer e Stanley Cohen demonstraram que o rDNA também poderia ser implantado em bactérias, que replicam o DNA sintetizado ao replicarem-se.

DNA RECOMBINANTE

Aplicações Possibilita diversos estudos moleculares sobre regulação, estrutura e função dos genes, RNA e proteínas de diversos organismos Desenvolvimento de vacinas Desenvolvimento de terapias gênicas Produção de produtos biotecnológicos, medicamentos e enzimas Diagnóstico médico Tecnologia forense

Você sabe o que é um Organismo Geneticamente Modificado (OGM)? E que esses organismos podem auxiliar na produção de medicamentos e de plantas resistentes à ataques de insetos?

DNA recombinante (rDNA) são moléculas de DNA formadas pela combinação de dois trechos de DNA de diferentes organismos. A construção do rDNA é possível devido à diversas técnicas que permitem isolar os trechos de interesse, juntá-los em uma única molécula e implantá-la em outro organismo. O principal processo da tecnologia do rDNA é a clonagem molecular do DNA.

VOCÊ SABIA?90% de todos os produtos alimentícios possuem um derivado de OGM. Isso porque diversas enzimas que participam de importantes reações como redução de deterioração e melhora na filtração, são produzidas a partir de um OGM, como a bactéria E. coli.

5. inserir os fragmentos na bactéria

6. Selecionar e isolar as bactérias

4. Unir os fragmentos

3. Purificar o gene de interesse

1. Definir o gene de interesse

2. Isole o gene de interesse

Para isolar o gene, os fragmentos de DNA devem ser digeridos pelas mesmas enzimas de restrição

Como as extremidades foram cortadas pelas mesmas enzimas de restrição, elas possuem sequências complementares.

Dada a complementariedade de bases, os fragmentos podem ser unidos pela enzima DNA ligase, formando um plasmídeo com o gene de interesse.

Em procariotos, existem fragmentos de DNA circulares chamados plasmídeos. O seu gene de interesse está no fragmento A, mas você precisa que ele seja inserido no plasmídeo B (vetor), para que possa ser expresso pela bactéria.

O plasmídeo gerado também contêm o gene de resistência a antibiótico. Logo, cultivando as bactérias em meio com antibiótico, são selecionadas e isoladas apenas aquelas que incorporaram o plasmídeo.

O plasmídeo formado é colocado em cultura junto com a bactéria, que os incorpora e é capaz de expressar o gene