marcha bacteriológica I

MARCHA BACTERIOLÓGICA

Se obtiene una muestra tomada en hisopo de materia fecal de un porcinoEl protocolo que acompaña la muestra, nos indica que el veterinario observó diarrea sanguinolenta en varios cerdos del criadero

BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

CICLO DEL MATERIAL

Se dió a entender que el estado es malo y que no hay antecedentes de un problema similiar así en la granja. Con esta información me pregunto : ¿Qué nivel de bioseguridad utilizo para manipular la muestra? NIVEL DE BIOSEGURIDAD 3

• El MO en estudio causa patología grave y de díficil tratamiento

• El nivel de riesgo individual es elevado y el riesgo comunitario moderado
• Puede o no producir muerte
• La infección puede ser adquirida a través de aerosoles y por fluidos biologicos

No se hace mención a nivel país asi que se descarta la idea de un agente exótico

OBSERVACIÓN DIRECTA

¿Cómo proceso la muestra? Suspendo la muestra en sc fisologica. ¿Por qué? La suspensión va a ser utilizada para extender sobre el portaobjetos para la OD

Antes de llevar acabo la tinción, inicialmente hay 3 pasos a seguir:

Se realiza la tinción de Gram ¿Por qué utilizamos esta coloración? La misma es una coloracion diferencial que permite observar la morfologia de la bacteria y aporta informacion sobre la composicion de la pared celular de la misma¿Pero qué significa que sea diferencial? Que consta de un colorante primario (cristal violeta), decoloracion con alcohol (paso primordial!!!!) y un colorante de contraste (safranina) ¿Qué observamos al microscopio? Evidencio bacterias Gram - con forma de bacilos, bordes rectos y puntas redondeadas, de tamaño grande. Puedo suponer que se trata de MO no exigente y posiblemente anaerobio facultativo, mesófilo, isosmótico y neu trófilo

BACILOS

SIEMBRA

La siembra se realiza para colocar a los microorganismos en un medio nutritivo favorable que les permite el desarrollo y multiplicación. Cómo procedemos ahora? Para poder realizar una correcta identificación, es necesario aislar al MO en un medio de cultivo. Teniendo en cuenta el metabolismo y requerimientos, y el origen de la muestra (materia fecal) decido sembrar en un medio de cultivo selectivo diferencial agar Mac Conkey, donde se inhibe el crecimiento de gram + y se favorece el desarrollo delas gram - (enterobacterias), que son las de mi interés a aislar y luego idenftificar.

Se realiza la técnica por agotamiento en superficie ¿En qué atmósfera incubo la muestra? ¿A qué temperatura? ¿Por cuánto tiempo?Se cultiva a una temperatura de 37° C, óptima para una gran porcentaje de bacterias por 24 horas. Se empieza por un día entero como mínimo para tiempo de desarrollo, en una atmósfera aeróbica, debido a que se llegó a considerar que se trata de bacterias anaeróbicas facultativas por lo que la precencia de oxígeno no es toxico y hasta pueden llegar a utilizarlo.

Obtengo el cultivo y ¿qué observo? Veo colonias de superficie lisa con halo turbio Me pregunto ¿Se encuentra en pureza? Veo que la morfología de las colonias es la misma ya que son de igual forma y que sus bordes, la altura, el color y la superficie también son iguales, por lo tanto, puedo llegar a la conclusion de que se trata de un cultivo puro. ¡No hay que olvidar que luego de obtener el cultivo, se debe realizar la tinción de Gram! ¿Por qué es necesario? Para confirmar los mismos MO vistos en la observacion directa

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Estas pruebas se realizan en pureza y en crecimiento exponencial y nos permiten identificar la presencia o ausencia de enzimas o vías metabólicas en la bacteria, lo que nos aporta mayor conocimiento fenotípico de la misma. Entonces nos preguntamos ¿A qué pruebas bioquímicas reacciona esta bacteria? Prueba de oxidasa : resultado negativoPrueba de catalasa: resultado positivoPrueba de oxido fermentación: oxida y fermenta la glucosa con produccion de acido y gas Rojo metilo: positivo Indol: positivo Voges Proskauer: negativo

ANTIBIOGRAMA

¿Para qué se realiza? Para conocer la susceptibilidad de la bacteria a distintos antimicrobianos

Condiciones: -Agar Mueller Hilton (espesor de 4mm) -Bacteria en pureza -Fase logaritmica de crecimiento -Turbidez 0,5 escala Mc Farland

Primero realizo un antibiograma por difusión :

¿CÓMO SE HACE?

¿Qué observo y qué resultados obtengo? -Se observa halo de 17 mm de diámetro para los discos de Polimixina, Tetraxiclina - Se observa halo de 12 mm con la Gentamicina y Penicilina Cuando el halo es mayor o igual a 17--> MO presenta sensibilidad al antibiotico Conclusiones: El MO es resistente a gentamicina y a antibiotico ꞵ- lactámicos Se debe administrar Polimixina como antibiotico con el fin de inhibir el desarrollo del MO

VACUNA

<En este caso el veterinario solicitó la posibilidad de preparar una vacuna ante dicha bacteria>

¿Cómo producimos una vacuna? Mediante la modificación de la virulencia del patógeno ¿Cómo puedo atenuar la virulencia? La atenuacion de la virulencia se obtiene por cultivos y subcultivos en el laboratorio, por acción del calor, del ambiente de incubación, agentes químicos (antibióticos) Los gérmenes atenuados se emplean para vacuna En este caso el factor de virulencia que se trata de atenuar son las toxinas, especificamente enterotoxinas ya que el animal presentó diarrea. Esta atenuación se realiza mediante el envejecimiento de los cultivos, donde se deja que el cultivo con basilos gram - tome contacto con el aire por un largo periodo. ¿Esto que provoca? Que las bacterias se adapten a un medio sin defensas del hospedador, provocando que las toxinas sufran mutaciones genéticas que dismuyen su acción.

Se le comunica al veterinario encargado del criadero que el tratamiento de la bacteria puede realizarla en base a Polimixina y para inmunizar a los cerdos, puede utilizar la vacuna diseñada especialmente para esta patología con una dosis adecuada. Se recomienda aislar los cerdos que presentaron diarrea de los individuos sanos. Como medidas de prevención se sugiere mejorar la higiene y el ambiente donde habitan los animales. Un ambiente seco, tibio y bien ventilado reduce la persistencia ambiental de la bacteria que uno sospecha.

FIN DE LA MARCHA BACTERIOLÓGICA- Desinfectar la mesada con Alcohol al 70% - Apartamos el material para ser esterilizado posteriormente en el autoclave, y los residuos patológicos se embolsan y se tiran