אבחון בעזרת נוגדנים

אימונודיאגנוסטיקה

אבחון באמצעות נוגדנים

התחלה

1. מה נרצה לאבחן?

תוכן

2. אבחון באמצעות הצמתה

3. אבחון בשיטת אלייזה

4. אבחון בשיטת תספיג מערבי

5. סימון רקמות בנוגדנים מצומדים לאנזים או לחומר פלואורוסנטי

6. כיצד בוחרים שיטה?

7. שאלות סיכום

מה נרצה לאבחן?

לאיזו מטרה נדרש אבחון באמצעות נוגדנים?

סרקו את הקוד למענה

לחצו לצפייה בתוצאות

אבחון באמצעות הצמתה

תהליך ההצמתה (אגלוטינציה) מתרחש כשזרוע Fab אחת של הנוגדן נקשרת לאנטיגן אחד, לדוגמה חיידק, והזרוע האחרת – לאנטיגן בעל אפיטופ זהה. בפועל, בגוף, תופעה כזו תשפר את כושר נטרולו של האנטיגן וסילוקו מהגוף, והיא תתרחש ביתר קלות אם אותו אפיטופ יתבטא על פני האנטיגן מספר רב של פעמים.

אבחון באמצעות הצמתה - מאפיינים

- בתגובת הצמתה אפשר להבחין גם ללא מיקרוסקופ - אפשר לבצע הצמתה רק על אנטיגנים המוצגים על פני תאים - בהצמתה נוצרים צברים של אנטיגנים ונוגדנים

בדיקת סוג דם באמצעות הצמתה

מחלקים דגימת דם לשלוש מבחנות ולכל מבחנה מוסיפים נוגדן כנגד אחד מהאנטיגנים A, B או RH על פי תוצאות ההצמתה אפשר לדעת מהו סוג הדם

Subtitle

בואו נראה מה למדתם

הקליקו לצפייה בסרטון

בדיקת הריון באמצעות הצמתה

הצמתה - יתרונות וחסרונות

חסרונות

יתרונות

שיטה פשוטה ליישום

לא ניתן לבצע על אנטיגנים מומסים

לא ניתן לבצע על אנטיגנים תוך תאיים

שיטה מהירה

ניתן לזיהוי בעין

אין צורך בנוגדנים מסומנים

היעילות תלויה בכמות האנטיגן על קרום התא

אבחון בשיטת אלייזה

שיטת אלייזה משמשת לאבחון כמותי של נוגדנים או אנטיגנים המסיסים בתמיסות כמו דם, שתן ועוד

שלב ראשון

אנטיגן נצמד לפלטת 96 באריות

שלב שני

מוסיפים נוגדנים מסומנים ספציפיים לאותו אנטיגן

שלב שלישי

שוטפים את שאריות הנוגדנים שלא נקשרו

שלב רביעי

מוסיפים מצע לאנזים שקשור לנוגדן

שלב חמישי

מודדים את עוצמת הצבע שנובעת הפירוק הסובסטרט

הקליקו לצפייה בסרטון

אבחון בשיטת אלייזה - סוגי אלייזה

אלייזה בלתי ישירה

אלייזה ישירה

אלייזה סנדביץ'

שימוש בנוגדן שניוני מסומן להגברת האות

קיבוע נוגדן לזיהוי אנטיגנים ושימוש בנוגדן ראשוני מסומן

שימוש בנוגדן ראשוני מסומן לזיהוי נוכחות אנטיגנים

אלייזה

לחצו על הפלטה

מה קורה בתוך הבארית?

קבעו אנטיגן לצלחת

אנטיגן

הוסיפו פלזמה

בתוך הפלזמה יש מגוון רחב של מולקולות בהם נוגדנים ואנטיגנים שונים

נוגדן ספציפי לאנטיגן

נוגדן לא ספציפי

נוגדן לא ספציפי

הדגירו

רק הנוגדנים הספציפיים לאנטיגן נקשרים אליו ושאר המולקולות נשטפות החוצה

נוגדן קשור לאנטיגן

הוסיפו נוגדן שניוני מסומן

הנוגדן השניוני נקשר לאיזור FC של הנוגדן הראשוני ומחובר אליו אנזים שבהוספת סובסטרט ייצור צבע שאת עוצמתו אפשר למדוד בספקטרופוטומטר

נוגדן שניוני מסומן

קראו את התוצאות

קריאת התוצאות

ככל שריכוז הנוגדנים בדם גבוה יותר יתחברו יותר נוגדנים לאנטיגן המקובע ובעקבות כך יתחברו יותר נוגדנים שניוניים והצבע יהיה חזק יותר.

בואו נראה מה למדתם

זיהוי נוגדנים במבחן אלייזה

בעת זיהוי נוכחות נוגדנים במבחן אלייזה, עוצמת הצבע תהיה ביחס ישר לכמות הנוגדנים בנוזל

זיהוי נוגדנים לפפילומה בשיטת אלייזה

אלייזה - יתרונות וחסרונות

חסרונות

יתרונות

שיטה פשוטה ליישום

רגישות גבוהה בזיהוי אנטיגנים

נדרש ציוד מתאים לקריאת התוצאות

יש צורך בנוגדנים מסומנים

ספציפיות גבוהה

אפשרות לכימות אנטיגן

שיטת תספיג מערבי משמשת לאבחון כמותי של נוגדנים או אנטיגנים המסיסים בתמיסות כמו דם ושתן או בחלבונים שהופקו מתאים

אבחון בשיטת תספיג מערבי (Western blot)

שלב ראשון

הפקת חלבונים והכנה להרצה

שלב שני

הרצת החלבונים בג'ל אלקטרופורזה

שלב שלישי

העברת החלבונים לממברנת ניטרוצלולוז

שלב רביעי

הוספת חלבון אינרטי

שלב חמישי

חשיפת הממברנה לנוגדן ראשוני

שלב שישי

הוספת נוגדן שניוני מסומן

שלב שביעי

קריאת התוצאות

לחצו על כל אחד מהשלבים על מנת ללמוד עוד

תספיג מערבי - שיטות זיהוי

בואו נראה מה למדתם

תספיג מערבי - ניתוח התוצאות

תספיג מערבי - יתרונות וחסרונות

חסרונות

יתרונות

שיטה פשוטה ליישום

רגישות גבוהה בזיהוי אנטיגנים

נדרש ציוד מתאים לקריאת התוצאות

יש צורך בנוגדנים מסומנים

ספציפיות גבוהה

אפשרות לכימות אנטיגן

שיטה איטית

סימון רקמות ותאים בנוגדנים מצומדים לאנזים או לחומר פלואורוסנטי

סימון רקמות ותאים בנוגדנים מצומדים לאנזים או לחומר פלואורוסנטי

שלב ראשון

הכנת חתכי רקמה או דגימות תאים

שלב שני

צביעת התאים או החתכים באמצעות נוגדנים מסומנים

שלב שלישי

התבוננות וצילום באמצעות מיקרוסקופ אור או פלאורוסנטי

לחצו על כל אחד מהשלבים על מנת ללמוד עוד

דוגמאות לסימון תאים או חתכים

סימון חתך של רקמת קיבה באמצעות נוגדן מצומד לאנזים

סימון תאים בתרבית באמצעות נוגדן מצומד לחומר פלואורוסנטי

יישומים לסימון תאים או חתכים

סימון רקמות ותאים - יתרונות וחסרונות

חסרונות

יתרונות

אפשר לצבוע תאים שלמים ורקמות

אפשר לזהות כמה סוגי אנטיגנים במקביל

נדרש ציוד מתאים לקריאת התוצאות

יש צורך בנוגדנים מסומנים

ניתן לבצע על אנטיגנים תוך תאיים

על פי מה נבחר את השיטה המתאימה?

• על פי מה שרוצים לזהות - תאים, רקמות, אנטיגנים ממברנליים, אנטיגנים תוך תאיים, אנטיגנים מסיסים

• על פי הציוד שקיים במעבדה

• על פי המיומנות של מבצע הניסוי

בואו נראה מה למדתם

שאלון

שיטות לאבחון בעזרת נוגדנים

התחלה

1/5

באיזה שיטה אבחר אם אני רוצה לבדוק היכן מתבטא אנטיגן בתוך התא?

תספיג אימונולוגי

אלייזה

FIA

2/5

באיזו שיטה אבחר אם אני רוצה לזהות אנטיגנים בדם של חולה?

הצמתה

תספיג אימונולוגי

IHC

3/5

באיזו שיטה אבחר אם אני רוצה לזהות סוג דם של אדם מסויים?

אלייזה

FIA

הצמתה

4/5

באיזה שיטה אבחר אם אני רוצה לזהות אנטיגנים מסיסים אך אין לי מתקן הרצת ג'ל במעבדה?

אלייזה

תספיג אימונולוגי

הצמתה

5/5

באיזו שיטה אבחר אם אני רוצה לזהות אנטיגנים תוך תאיים?

תספיג אימונולוגי

IHC

הצמתה

לא זיהיתם את האנטיגן

נסו שוב

כל הכבוד!

שאלות סיכום

שאלות סיכום

שאלות סיכום

שאלות סיכום

שאלות סיכום

שאלות סיכום

שאלות סיכום

תודה רבה!