Tecnicas de semeadura

TÉCNICAS DE SEMEADURAS

Tubos e PlacasPour plate e Spread plate

CAIO LOURAN; JEANA CASTRO; KARINNY FARIAS E RAFAELLA COELHO

SOBRE AS TÉCNICAS DE SEMEADURA

finalidades:

1. estocagem de bactérias.
2. obtenção de massa de microorganismos.
3. testes fenotípicas baseado no metabolismo de açucares , aminoácidos e outros compostos do carbono.
4. verificação de possível motilidade.
5. observação de crescimento bacteriana.

OBJETIVO: são métodos consistem na passagem de pequena quantidade de microorganismos para um meio de cultura ideal para o desenvolvimento.

PLACA DE PETRI meio sólido

• Estriamento

Uma alçada da cultura vai ser passado para uma placa com meio sólido para realizar a estria. Uma estria reta deve ser realizada, depois uma estria zig-zag é feita por toda a placa.

• Esgotamento em estrias ou estrias múltiplas

A placa deve ser dividida em 4 quadrantes.Procedimento: estriar metade da placa em movimentos zig-zag. Girar a placa em 90º, estriar 1/4 da placa, girar novamente em 90º e estriar o restante da placa. O objetivo é obter colônias isoladas.

• Pique central

Objetivo é isolar colônias de fungos filamentosos. Indo do centro da placa para extremidade.

• Semeio para material potencialmente misto

Trata-se de um meio não seletivo. 1/4 da placa deve ser semeado por estrias e no outro lado da placa deve-se fazer 3 a 4 riscos.Objetivo é isolar diferentes tipos de microorganismo em um mesmo meio de cultura

TUBOS meio sólido

• Estria sinuosa

Feito da base do meio para extremidade realizando o movimento de zig-zag de forma que seja feito uma estria. Objetivo: obtenção de crescimento bacteriano ou observação de propriedades bioquímicas.

• Uniforme em linha reta

Feito da base do meio para extremidade em linha reta Objetivo: obtenção de pequeno crescimento bacteriano e observação das funções metabólicas de algumas bactérias.

• Picada central e sinuosa

Com uma alça bacteriológica coletar o inóculo e tocar no fundo do tubo vindo até o meio de forma que seja feito estrias. Objetivo: observar as funções metabólicas de alguns microrganismos em diferentes níveis de carbono com a presença ou não de oxigênio.

TUBO meio líquido

TUBO meio semi sólido

• Difusão

Coletar o microrganismo com a alça e diluir no tubo agitando-a até dispensar o microrganismo no meio líquido.Objetivo: fazer repique genérico para crescimento bacteriano em meio líquido e observar propriedades bioquímicas

• Picada central meio semi sólido

Com a alça bacteriológica coletar o inóculo introduzindo tubo até mais ou menos 1/3 ou ½ do tubo.Objetivo: Identificar a fermentação ou motilidade do microrganismo

Pour Plate ( semeadura em profundidade)

É realizado uma diluição seriada e adicionado alíquotas em uma placa de Petri esterilizada vazia, onde posteriormente será adicionado ágar liquefeito (fundido). Após solidificação, as placas serão incubadas. A placa mostrará colônias na superfície e colônias situadas logo abaixo. Objetivo: isolamento de microrganismos móveis ou quando há suspeita de microrganismos anaeróbios. Também é utilizado para a contagem microbiana em diferentes diluições, em uma análise de alimento.

1. Pesar o alimento selecionado para a análise;
2. Transferir para o saquinho do "stomacher" e realizar diluição 1:10, 1:100 e assim por diante;
3. Pipetar 1,0mL de cada diluição e transferir para uma placa esterilizada;
4. Inverter 15-20 mL de meio sólido fundido e homogeneizar a placa em movimentos em “8” e esperar solidificar;
5. Incubar as placas em posição invertida a 35 ºC por 24h.

Spread plate (semeadura por espalhamento)

Muito utilizada na microbiologia de alimentos, amostras alimentares são diluídas, maceradas e pipetadas em placas de Petri estéreis com meio de cultura específico para inspeção (Agar para Contagem Padrão). Esta técnica também pode ser aplicada para analise de leveduras, estafilococos e bolores. Utiliza-se o método de “espalhamento” em placa ao espalhar o material com o auxílio da alça de Drigalski (para obtenção de colônias isoladas após diluição). Objetivo: obtenção e contagem do crescimento bacteriano nas análises de microrganismos.

REFERÊNCIAS

• DINIZ, Cláudio Galuppo. Roteiro de aulas práticas. Universidade Federal de Juiz de Fora. 2018.
• MELLO, Aloysio et al. Apostila de Aulas Práticas. Bacteriologia. UFF, 2007.
• Serial dilutions and pour plate technique. Microbial Zoo. 2020.
• How to use Spread Plate technique. Microbiology Mantra. 2020.