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ELECTROFORESIS EN GEL DE CAMPOS PULSANTES

ALMUDENA BARRERO Y ALEJANDRA DE HARO

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1. ÍNDICE

2. ELECTROFORESIS EN CAMPOS PULSANTES.2.1. FUNDAMENTO. 2.2. VARIANTES. 2.3. APLICACIONES. 2.4. VIDEO. 3. BIBLIOGRAFÍA.

2. ELECTROFORESIS EN GEL DE CAMPOS PULSANTES

2.1. FUNDAMENTO

Consigue la separación de grandes fragmentos de ADN induciendo su reorientación mediante cambios periódicos en el campo eléctrico, cuya duración determina el intervalo de tamaños que se puede separar (cuanto mayor sea el tamaño de los fragmentos a separar, mayor ha de ser la duración de los campos aplicados).

Fue desarrollada en 1984 por Schwartz y Cantor, denominándose Electroforesis en Gel de Campo Pulsante (PFGE) con el que consiguieron separar cromosomas de levadura de varios cientos de kpb.

2. ELECTROFORESIS EN GEL DE CAMPOS PULSANTES

2.1. FUNDAMENTO

Los fragmentos se someten a varios campos eléctricos de distinta orientación. Al aplicarse el primero durante cierto tiempo, los fragmentos se estiran y se orientan según la dirección de dicho campo. Si ahora se aplica un segundo campo, perpendicular al anterior, se obliga a los fragmentos de ADN a relajarse y elongarse y alinearse de acuerdo con este segundo campo eléctrico. La duración de los campos eléctricos se denomina duración del pulso y determina el intervalo de los tamaños de ADN que se pueden separar; estos intervalos son muy variables, desde fracciones de segundo para fragmentos muy pequeños hasta 1-2 horas para fragmentos muy grandes

2. ELECTROFORESIS EN GEL DE CAMPOS PULSANTES

2.1. FUNDAMENTO

El equipo necesario para realizar una PFGE se diferencia notablemente del de otras electroforesis, tanto en la cubeta como en la fuente de alimentación. La cubeta tiene un conjunto de electrodos en lugar de un par, cuya disposición y diseño posibilitan las distintas orientaciones del campo eléctrico.

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2.2. VARIANTES

Se realizan dos electroforesis. PFGE Bidimensional.

Los cambios en la secuencia de base de las moléculas de ADN cromosómico de organismos eucariotas unicelulares que provocan diferencias de unas pocas de base o que no varían en el tamaño de los cromosomas, no pueden ser detectados mediante la obtención del cariotipo electroforético de dichos organismos en una sola electroforesis, por lo que se llevan a cabo dos electroforesis. Esto ha permitido explorar mayores regiones del genoma de eucariotas y detectar variaciones pequeñas en el tamaño de los cromosomas de estos microorganismos.

2. ELECTROFORESIS EN GEL DE CAMPOS PULSANTES

2.3. APLICACIONES

Además es uno de los progresos más útiles de la epidemiología molecular en las últimas décadas. Esta técnica también ha demostrado que es altamente discriminatoria y se utiliza en estudios epidemiológicos de brotes que son causados por microorganismos como: - Escherichia coli - Salmonela - Listeria… Podemos destacar que se utilizó esta técnica para hacer un estudio del brote de listeriosis que hubo en 2019 en España. El principal inconveniente de esta técnica es que es un proceso costoso, por lo que no siempre es el escogido para utilizarlo.

Las principales aplicaciones de esta técnica son: - La caracterización de micobacterias. - Obtención de cariotipos de hongos. - La clasificación de levaduras. - Estudios de moléculas de ADN. - El desarrollo de vacunas y programas de inmunización.

2. ELECTROFORESIS EN GEL DE CAMPOS PULSANTES

2.3. APLICACIONES

ADN

MICOBACTERIAS

VACUNAS

LISTERIA

2.4. VIDEO

ELECTROFORESIS EN GEL DE CAMPOS PULSANTES

3. BIBLIOGRAFÍA

https://es.wikipedia.org/wiki/Electroforesis

https://es.slideshare.net/hrmorales71/electroforesis-en-campos-pulsantes

https://www.youtube.com/watch?v=KGZBRfHQU_Y

FIN

ALMUDENA BARRERO Y ALEJANDRA DE HARO