Cannabis - Grupo Márcio

Cannabis sativa

e a utilização de marcadores moleculares para identificação e rastreabilidade de espécimes

Lucas de Oliveira Pereira Ribeiro

início

Background

Trabalho Mestrado

Produto Final

Projeto Atual

Histórico do Lab

Perspectiva Futura

Genoma Cannabis

genoma referência

Esboço (2011)High-quality (2019)

Estrutura cromossomal

9 pares autossômicos 1 par sexual (X e Y)

Marcadores

Indel, RAPD, SNPs e STRs

Preferência Forense

IdentificaçãoRastreabilidade Individualização

Microssatélites

SNPs

cannabis

Literatura - "Estado da Arte"

Fett et al.

Houston et al.

STRs e SNPs

2018

2015 e 2017

34 STRs(29 nucleares, 1 mitocondrial e 4 cloroplastidial) Centenas de SNPs

Aplicou o Painel 2015 em 72 amostras brasileiras

Dois painéis multiplex de 13 loci STR

Histórico Lab

13-loci STR multiplex system for Brazilian seized samples of marijuana: individualization and origin differentiation

Fett et al. 2018

Histórico Lab

Paraguai

Identificar

Diferenciar de acordo com a origem

Polígono da Maconha

Exterior

Background

Trabalho Mestrado

Produto Final

Projeto Atual

Histórico do Lab

Perspectiva Futura

Trabalho Mestrado

Evaluation of two 13-loci STR multiplex system regarding identification and origin discrimination of Brazilian Cannabis sativa samples

Ribeiro et al. 2020

Trabalho Mestrado

AUmento amostral

Total de 94 amostras

Comparação dos painéis

Painel 2015 Painel 2017

Marcadores

↓ Baixa Heterozigozidade

Doutorado - Projeto atual

desenvolver uma ferramenta molecular que possibilite a identificação e a rastreabilidade de amostras de Cannabis sativa traficadas em território brasileiro

Disponibilizar nos bancos de dados sequências de DNA de C. sativa cultivadas e traficadas no território brasileiro

Construir um sistema multiplex único para análise de C. sativa eficaz e efetivo para uso na rotina forense brasileira

Criação e manutenção de um Biobanco genético para Cannabis sativa. Descrevendo e atualizando as frequência alélicas populacionais.

Avaliar centenas de milhares de marcadores moleculares e, através de análises de bioinformática, verificar os mais informativos para identificação e rastreabilidade de C. sativa

Descrever as frequências alélicas dos marcadores moleculares encontrados nas plantas traficadas no Brasil, por população

Doutorado - Projeto atual

Ampliação amostral e representatividade

Seleção dos marcadores

Amostras representativas do território brasileiro

Painéis multiplex 2015 e 2017

Avaliação e Frequência dos marcadores selecionados

Análise in silico

STRSNPs (microhaps)

Análise amostral e "produto final"

Genomas completos (SRAs)

Genoma referência

Seleção dos marcadores

Não

Whole Genome Seq.(Repositórios de SRA)

Controle Qualidade

Trimmagem

Sim

Seleção dos marcadores

Genoma de Referência

Pareamento

Seleção dos marcadores

Poli G

Kmer

Poli G

SRR10578262

SRR10578267

SRR10578257

Retorno às instituições

Relatório técnico

Genética canábica

Inteligência Policial

Background

Trabalho Mestrado

Produto Final

Projeto Atual

Histórico do Lab

Perspectiva Futura

Produto Final

Painel multiplex completo

Produto Final

PoPs para cálculos forenses

Frequência alélica por população

Uma ferramenta molecular capaz de identificar espécimes de Cannabis sativa e diferenciá-las de acordo com a origem geográfica.

Treinamento

PoPs para os experimentos

Perspectiva Futura

Biobanco Brasileiro de Cannabis - BBC

Obrigado

Lucas de Oliveira Pereira Ribeiro

oprlucas@gmail.com(51)99893.7615

início

Single Nucleotide Polymorphism

Short Tandem Repeats

Sequências curtas (2 a 6 nucleotídeos) que se repetem em tandem

Substitução de um único nucleotídeo (transição ou transversão)

Uma a cada 33kb Uma a cada 6kb

0,67 - 6,1 a cada 1kb 1,07 a cada 1kb

Alto Polimorfismo, alta heterozigosidade, alta reprodutibilidade

Baixa mutação e Alta prevalência

Microhaplótipos *

Padrão-ouro, CODIS

SWGDAM

Evaluation of a 13-loci STR multiplex system for Cannabis sativa genetic identification(Houston et al. - 2015)

ISFG

19

marcadores STR ao total

B05H06 D02 C11 501 CS1 305

92594910 5159 9043 1528 3735

H09B01 E07 ANUCS 301 ANUCS 302 308

Developmental and internal validation of a novel 13 loci STR multiplex method for Cannabis sativa DNA profiling(Houston et al. - 2017)

Painel 2015

H09B01 E07 ANUCS 301

D02 C11 501 CS1

ANUCS 302 308 B05 H06

305

Painel 2017

9259 4910 5159 9043

D02 C11 501 CS1

1528 3735B05 H06

305

Amostras atuais

Polígono da Maconha

24 (2015)

12 (2017)

16 (2018)

Sementes apreendidas SP

31 (2014-15)

Paraguai

5 (2015)

5 (2017)

Amostragem

1 (2018)

Santa Catarina

22 (2019)

22 (2020)

Amostragem

Matriz biológica

> Folhas

> Inflorescência

> "Prensado"

Volume

Extração: 20mg

armazenamento

[~ 10 ng/μL]

stock: 1g

DNAeasy Mericon Kit

Painel 2017

9259 4910 5159 9043

D02 C11 501 CS1

1528 3735B05 H06

305

192 Milhões

67% dos jovens atendidos pelo CRATOD

usuários de maconha

3ª droga mais consumida