TP 11: les enzymes

TP 11: les enzymes

Agathe Enora

Est-ce qu'une seul et même enzyme peut agir sur différents substrats? Et donc avoir une double spécificité.Est-ce qu'une seul et même enzyme peut agir sur différents substrats? Et donc avoir une double spécificité.

Nous allons dans cette experience: Mesurer la présence ou l'absence du substrat au début et à la fin pour comparer et déterminer l'action de l'enzyme. De manière à déduire si les enzymes transforment plusieurs substrats différents.

PROTOCOLE:

Mettez dans les tubes 5 ml de substrat et 1 ml d’enzyme ou d’eau Prélevez 2 gouttes des tubes avec l’amidon que vous placez dans 3 puits de la plaque de titration. Ajoutez dans chaque puits 2 gouttes d’eau iodé. Placez les tubes 10 minutes au bain marie à 35 °c A la fin de l’expérience, pour les tubes avec l’amidon - prélevez 2 ml que vous placez dans un autre tube avec 2 ml de liqueur de Fehling. Mettez les 3 tubes ( tubes 7, 8 et 9) 5 min au bain marie à 80°c. - prélevez 2 gouttes des tubes et mettez les dans les puits de la plaque de titration avec de l’eau iodée. : observez les résultats

TEMOIN: Pour réaliser cette expérience, nous avons fait deux expériences témoins afin de prouver que les substrats ne peut pas se transformer tout seul mais qu'il avait besoin d'une enzyme pour faire cela. Nous avons donc mis dans un tube à essaie le premier substrat qui est l'amidon avec de l'eau puis dans un second tube à essaie le deuxieme substrat qui est l'ovulbamine avec de l'eau. Ces deux solutions qui sont de même volume que les autres vont subir les même actions que les solution enzyme/substrat.

Nous pouvons donc en conclure que un enzyme peut transformer que un substrat. Dans le cas de notre expérience, l'amylase transforme l'amidon et la pepsine transforme l'ovalbumine.

Partie 2: Pratiquer des langages

Nous allons étudier l'origine du disfonctionnement d'une carboxypeptidase.

Tout d'abord, qu'est-ce qu'une carboxypeptidase ? C'est une enzyme d'origine pancréatique et intestinales présentes dans le duodénum, elle à pour fonction d'hydrolyser les polypeptides en enlevant un acide aminé à la fois, en commençant par l'extrémité du polypeptide qui possède un groupement carboxyle libre.

Sur anagène, nous avons comparé la séquence peptidique d'une carboxypeptidase fonctionnelle avec celle d'une carboxypeptidase inactive. Nous avons obtenu ces résultats:

Ici, on peut voir que la seconde séquence a subi une mutation par substitution à la 69 ème position: l'acide aminé His a été remplacé par Gly.

Ici, on observe le même type du mutation: un acide aminé Tyr est remplacé par un acide aminé Gly dans la séquence mutée en position 248 (la position de la mutation n'est pas la bonne sur cette capture d'écran).

Ensuite sur Rastop, nous avons modéliser les deux séquences peptidiques de carboxypeptidases: fonctionnelle (gauche) et inactive (droite)

On peut donc en déduire que la cause d'un disfonctionne-ment de cette enzyme est la mutation d'acides aminés dans la séquence peptidique d'un carboxypeptidase, ici représenté par un acide aminé coloré en violet.

De ce fait, les mutations subis par l'enzyme, ne lui permettent plus de fonctionner, l'enzyme est alors inactive.