Protokół do in vitro 2

Izolacja komórek błony śluzowej macicy i założenie hodowli

protokoły i schematy hodowli

START

Indeks

Procedury krok po kroku

Wstęp

Procedura izolacji

Czas potrzebny

Procedura liczenia

I Wideo

II Wideo

Procedura hodowli

Wstęp

Taki efekt chcemy osiągnąć również my

Aby komórki endometrium mogły tak wyglądac w hodowli, jak na tym zdjeciu konieczne jest ich wyizolowanie z tkanek macicy. Naszym zwierzęciem doświadczalnym będzie świnia, gdyż ma ogromną macicę z dużą ilością endometrium

Rozkład jazdy w czasie izolacji

110-140 min

140-180 min

20 min

40min

50-70min

godzina 0

70-90 min

Płukanie po trawieniu II i I. łączenie komórek z obu traiweń

Liczenie i ocena żywotności

Trawienie enzymatycze I

Pobranie fragmentów macicy i izolacja skrawków endometrium

Rozdrabinianie mechaniczne skrawków endometrium

Przygotowanie miejsca pracy

Zbieranie komórek, płukanie i początek trawienia II

Nie będzie łatwo

Instrukcja obrazkowa

A tu pełny protokół izolacji ukryty

Trypsyna/kolagenaza

PBS

Rozcieńcz 1:1

Video

Jeden z możliwych protokołów izolacji komórek endometrium

Wideo

Izolacja błony śluzowej macicy świni w niedoskonałym technicznie filmie mojej produkcji

LIczenie i ocena żywotności komórek

Wykorzystamy liczenie komórek w komorze hemocytometru z siatką Burkera. Do oceny żywe-martwe użyjemy testu z aktywnym usuwaniem z komórek barwnika błękit Trypanu

Test żywotności z użyciem błękitu Trypanu pozwala szybko ocenić, która komórka ma uszkodzoną błonę komórkową (nie może wyrzucic barwnika i staje się niebieska. żywe komórki usuwają toksyczny barwnik poza błonę komórkową

Jakie hodowle mamy założyć ?

1. Klonowanie komórek w miękkim agarze w celu rozdzielenia różnych typów komórek wystepujących w pierwotnym izolacie2. Wytworzenie sferoidów w technice kropli wiszącej 3.Hodowla jednowarstowa płaska w celu wykorzystania jej do oceny toksyczności biomateriałów 4. Enkapsulacja komórek w alginianie sodu

Procedura założenia poszczególnych hodowli

Wideo prezentacja techniki kropli wiszącej

Procedura oceny poszczególnych hodowli

Ocena toksyczności materiałów pośrednia i bezpośrednia

Wykorzystamy równiez test z błękitem Alamar, gdyż testujemy zmiany absorbancji pożywki w wyniku aktywności metabolicznej komórek

Przygotowanie raportów

Przygotowanie rapoortów z hodowli zaopatrzonych we wstęp, metodykę, wyniki poszczególnych hodowli i testów oraz dokumentację zdjęciową i wnioski nalezy przygotować w zespołach prowadzących hodowle. Następnie umówimy się na spotkanie zdalne i Państwo je przedstawią w formie prezzentacji

Do zobaczenia