1SPE ouchterlony

III/ La répose adaptative

TP : Test Ouchterlony : déterminer les Anticorps présents chez un individu

Né en 1014, on lui doit la mise au point la méthode de double diffusion en gel qui est une méthode d'immunoprécipitation fondée sur la diffusion d’antigènes et d’anticorps en milieu solide (en général un gel d’agarose) à partir de puits placés en vis à vis.

Örjan Thomas Gunnarsson Ouchterlony

Marie Mayans- Lycée Beaussier-La Seyne sur mer

INDEX

1. problème2. protocole 3. présentation des résultats et raisonnement 4. conclusion 5. visualisation 3D des anticorps 6. analyse des séquences des chaînes des anticorps

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notre problème

Certaines maladies infectieuses considérées comme bénignes en temps normal peuvent avoir de graves conséquences sur le bon déroulement de la grossesse. Il est donc essentiel de savoir si ces les femmes sont immunisées, ont déjà contracté ces affections. Voilà pourquoi une sérologie est systématiquement prescrite en début de grossesse par exemple

• la toxoplasmose
• la rubéole
• la varicelle
• la listériose

Si le bilan sanguin indique que vous êtes immunisée (sérologie positive), pas d'inquiétude à avoir, vous ne pouvez plus attraper la toxoplasmose. Si vous n’êtes pas immunisée, il va falloir prendre quelques précautions pour vous mettre à l'abri de la contamination :

Proposez une démarche pratique permettant de mettre en évidence la présence d'anticorps spécifiques dans le sérum d'une patiente

matériel

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Matériel disponible

boite de pétri gélosée stérile

emporte pièce

gabarit de perçage

microtubes : sérum de la patiente

• déterminant antigénique du parasite de la toxoplamose
• déterminant antigénique du virus de la rubéole
• déterminant antigénique du virus de la varicelle
• déterminant antigénique de la listéria

marqueur

des pipettes

Protocole

• placez la boite sur le gabarit
• percez les puits avec l'emporte pièce
• identifiez les puits, sous la boite avec le marqueur
• ne pas griffer ni déchirer la gélose

• remplissez les puits avec une pipette par solution
• ne pas déborder, ne pas faire de gouttes sur la gélose

• fermez la boite
• attendez et observez sur le fond noir pour voir apparaître les résultats

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présentez les résultats

Complétez le schéma de la proposition pratique En utilisant des conventions pertinentes, schématisez à l’échelle moléculaire - Ce qui se passe entre 2 puits où se met en place un arc de précipitation. (Schéma 2a)- Ce qui se passe entre 2 puits où ne se met pas en place un arc de précipitation. (Schéma 2b)

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Concluez

• Quels sont les anticorps présents dans le sérum de la patiente,
• Devra-t-elle prendre des précautions particulières pendant sa grossesse ?

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On observe les anticorps

• ouvrez LIBMOL
• choisir "modèle théorique anticorps complet"
• (masquez "glucide")

LIBMOL

montrez qu'il est constitué de

• 4 chaînes protéiques : 2 lourdes et 2 légères
• reliées par des ponts disulfures

• choisir "anticorps anti-lysozyme", seul un site de fixation s'affiche
• comparez avec un autre anticorps présent dans la liste

montrez que

• la fixation au déterminant antigénique se réalise toujours au même niveau
• le site de fixation a une séquence spécifique du déterminant antigénique

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On analyse la séquence des différentes chaînes

• ouvrez anagène
• choisir les fichiers indiqués

ANAGENE

Comparez les différentes chaînes sélectionnées

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