Pràctica 1. a) Aïllament ARN

Aïllament i purificació d'ARN

Protocol Tripure (reactiu per a l'aïllament d'ARN)

Quantificació d'ARN

Pas 1. Homogeneïtzació

La quantificació de l'ARN té lloc mesurant l'absorbància de la dissolució final a 260 nm. Paralel·lament es mesura també la contaminació per proteïnes mirant l'absorbància a 280 nm. Una vegada acabat l'aïllament, es dilueix la mostra 100 vegades amb aigua lliures d'RNAses i es disposen 200 µL a un pouet de la placa per poder fer la mesura a un espectofotòmetre de plaques

Pas 2. Primera centrifugació

Pas 3. Segona centrifugació

Pas 4. Tercera centrifugació

Pas 5. Quarta centrifugació

Una unitat d'absorbància equival a 40 µg/mL. També s'ha de calcular el ratio de les absorbàncies a 260 i 280 nm, segons aquest es podrà saber la puresa de l'ARN purificat

Pas 6. Cinquena centrifugació

Pas 7. Pas final

Alertes ús de Tripure

Quantificació del gen de l'actina

Reacció en cadena de la Polimerasa (explicació)

Retrotranscripció

Amplificació

Retrotranscriptasa

Sybr Green

Procediment

Random hexamers

Ct

Resta de reactius

Retrotranscriptasa del virus HIV1

Interpretació resultats

Procediment de retrotranscripció

Aplicació 2

Aplicació 1

Light Cycler 480

Electroforesi en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE)

BioRad Mini Protean 3 gel and transblot system

Fonament

VIDEO

Acrilamida

Protocol

Visualització

Usos

BioRad Mini Portean 3 gel transblot system

Determinació dels paràmetres cinètics de la Polifenoloxidasa

Què és la Polifenoloxidasa

Fonament de la pràctica

​Pas 1. Homogeneïtzació

​Pas 2. Determinació de velocitats

​Pas 3. Càlculs

Crystal structure of Polyphenol oxidase 3 from Agaricus Bisporus